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分享《生化測定及其外包常見問題解答》中一個問題解答

發布日期:2019-05-16 12:34 瀏覽次數:

此前推薦了我們編寫的《生化測定外包及其常見問題解答》,共125個常見問題。
為了增加廣大用戶對此書的感性認識,本次給大家分享其中第56個問題的解答,供大家參考。
56. 數據變化不符合預期
在測定之前,用戶通常會根據參考文獻,或者此前自己實驗室的相關測定結果,對本次測定結果有一個預期變化趨勢。但是,有時會出現實際測定數據的變化趨勢不符合預期的情況。
56.1 檢查預期的依據
從生命科學研究來看,在預期的基礎上進行研究方案設計和準備樣本。但是這樣的預期一定要建立在堅實的依據上。
因此,當測定數據不符合預期時,首先應該回顧檢查當初提出這樣預期的依據是否堅實,不能刻舟求劍。
為什么在提出預期之后還要做實驗和測定呢?因為預期只是預期,并不是事實。預期能否成立,還行必須通過實驗來加以驗證。
56.2 檢查測定數據的技術重復性和樣本重復性
先查找技術重復性,以及計算公式和單位,有沒有問題;如果沒有問題,再看樣本重復性,如實查找樣本質量有沒有問題;如果兩者都沒有問題,那么就必須接受測定結果,而不是刻舟求劍!此時要做的是,如何解釋結果。有時不符合預期,反而意味著研究的新意,甚至是新發現。
56.3 代謝及其調控往往是立體和網絡狀的
尤其值得注意的是,代謝及其調控往往是立體和多通路的。因此某種處理并不必然導致某個指標發生顯著變化,包括特定化學物質的處理、轉基因和基因敲除等情況。因此,出現預期之外的結果是很有可能的。
例如,一個細胞中某種成分的含量會取決于三種平衡:輸入與輸出,合成與降解,游離態與結合態。上述三種平衡中,任何一種平衡的偏離都可能造成該成分含量的變化。當然,還存在補償效應,該成分含量沒有變化,也不等于三種平衡就一定沒有偏離。何況,參與合成的有多種酶,參與降解的同樣有多種酶,因此該成分含量的變化,就有多種可能造成,存在多種不同的組合。
56.4分析密切相關指標的變化
如果選擇了測定系列指標,那么由于這些指標密切相關,就可以通過相關指標的變化趨勢是否一致,來判斷該指標的變化是否正常,因為同時幾個相關指標變化都不正常的可能性比較小。另外,其它指標的變化能否解釋不符合預期的這個指標的實際變化趨勢等。
56.5 改變分母,重新計算數據
就某種測定指標而言,其變化趨勢除了與分子本身的變化趨勢有關外,還受到分母變化趨勢的很大影響。
原則上,為了準確反映該指標的變化趨勢,應該選擇在取樣周期內不發生顯著變化的另一個指標作為分母。如果取樣周期內作為分母的指標本身變化激烈,就會顯著改變分子的變化趨勢;如果分母變化不規律,就會導致分子變化也缺乏規律。
常用的分母包括鮮重、干重、可溶性蛋白質含量、細胞數量和器官與個體的數量等等。比較罕見的還要DNA含量等等。有時候換種分母,重新計算,分子就會呈現出某種變化規律。
值得指出的是,除了考慮分母在取樣周期內是否發生變化外,還需要考慮生理意義。例如,測定酶活性時常用可溶性蛋白質含量作為分母。但是,這是對生化中酶的比活力概念的誤用,因為此處用的是可溶性蛋白質含量,而不是該種酶蛋白的含量,該種酶蛋白只占粗酶液中可溶性蛋白質的很少一部分。如果樣本可溶性蛋白質含量不發生顯著變化還好,如果發生了顯著變化,就會導致酶活性變化趨勢發生顯著改變。更加重要的是,酶的比活力對于研究酶本身是有意義的,但是對于某種生物學現象而言,更加關注的是該酶的生理功能,此時用鮮重作為分母,應該更能反映該酶在此種生物學現象中的生理功能。

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